细胞冷冻保存,1.  材料：生长---之培养细胞、新鲜培养基、dmso (sigma d-2650)、无菌塑料冷冻保存管(nalgene　5000-0020)、0.  4%(w/v)trypan blue(gibcobrl15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法：(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->;-20 ℃30分钟--->;-80 ℃ 16～18小时(或隔夜)--->;液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量，亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温：利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1～-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。

程序降温仪其主要功能是：可以根据各种被冻存样品不同的需求，选择一种适合的降温速度进行冷冻。从而使被冻样品的复苏成活率得到很大的提升。由于智能程序降温仪的使用很灵活简便,该仪器---适用于：探索和优化各种被冻样品的冻存方案。上位机软件按照用户的编程，计算出当前的目标温度与实测温度的偏差值，用比例、微分、积分算法算出控制量。通过pdi输出电路去控制电磁阀的开关。当电磁阀开通时，液氮喷入冷冻室，风扇使液氮雾化并均匀地在箱内循环。改变电磁阀的开关频率，就控制了箱内的降温速度