再此背景下,---银行、细胞库等很多生物公司和相关研究机构变得火热起来,但冻存细胞是个“技术活”,选择合适的降温仪器,才能---珍贵的有高的复苏活性。免液氮的程序降温仪出现了。这款仪器针对于传统的液氮程序降温仪做了很大的技术---,采用---的斯特林循环引擎(stirling cycle engine),可提供的、重现性的生物制冷效果。
实践证明:使用倍玛特程控降温仪经热量补偿后,1-3℃ / min的降温速率可---提高冻存细胞的复苏率。除此之外,倍玛特程序降温仪可选配置有打印系统,可以记录生物样本批次冻存的温度曲线,并可打印保存。通过控制过程,消除批次实验中的差---,---所有批次生物样本冻存的稳定性和可重复性。 细胞的---,通常是从零下5度开始,这是因为细胞内外的液体都是盐溶液。当细胞内外的液体进入过冷态后,细胞外液结冰,这些冰基本上由不含盐分的水构成。
步骤:(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、,逐滴加入二--- (dmso)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞,用加的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液,程序降温仪批发,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(dmsozui后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
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