细胞往往会在温度剧烈变化中。通过使用细胞欣谕程序降温仪,选择合适的冻存液,设定合适的升降温速率,可有效地克服上述不利因素。实践证明,(经温度补尝后)每分钟1-3℃的冷冻速率可---提高冻存细胞的存活率。传统的生物样本降温通常采用-80℃低温冰箱进行分步骤冷冻,细胞程序降温仪,该方法的不足为:耗时长,整个降温过程大约需要---的时间;在降温过程中需要人为多次转移,给样本的降温带来众多不可控因素,从而导致样本的存活率降低;无法有效地消除结晶过程中释放的潜热,增大了样本的率。
细胞冷冻保存,1. 材料:生长---之培养细胞、新鲜培养基、dmso (sigma d-2650)、无菌塑料冷冻保存管(nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(gibcobrl15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法:(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->;-20 ℃30分钟--->;-80 ℃ 16~18小时(或隔夜)--->;液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量,亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温:利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1~-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
程序降温仪其主要功能是:可以根据各种被冻存样品不同的需求,选择一种适合的降温速度进行冷冻。从而使被冻样品的复苏成活率得到很大的提升。由于智能程序降温仪的使用很灵活简便,该仪器---适用于:探索和优化各种被冻样品的佳冻存方案。还能方便的测试出一种被冻细胞的相变温度。再编制出合适的降温程序后,能使被冻细胞迅速安全的渡过相变期。
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