细胞冷冻保存，1. 材料：生长---之培养细胞、新鲜培养基、dmso (sigma d-2650)、无菌塑料冷冻保存管(nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(gibcobrl15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法：(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->;-20 ℃30分钟--->;-80 ℃ 16～18小时(或隔夜)--->;液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时，程序降温仪器，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量，亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温：利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1～-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
冷冻前，首先要提前对冻存者本人做各种健康检查，同时进行---，包括、丙肝、支原体、衣原体、肝功能和血型检测等。然后，如一切结果无明显异常，可进行冻苏实验。每个男性对冷冻的耐受性有所不同，冷冻复苏后的存活率无法估计。因此，冻苏实验十分---，可帮助医生预测以后生育方式的选择。冷冻与冷冻人体其他组织一样，就是将和冷冻保护剂的混合物吸入冷冻管内，封口后放入程序降温仪内按设定好的降温程序降温，封闭于液氮罐，从此进入了长时间的“冬眠”状态。
程序冷冻仪是一种温变速率可调的程序控制冷冻系统，广泛应用于轻工、农、医、基础生物研究等各个领域中，用于淋巴细胞、组织库、细胞、细胞，动、植物细胞、心肌细胞等的冻存。程序冷冻仪的应用领域，主要如下：1、植物组织 、 药理学、组织。2、相同配型、研究—细胞。3、ivf（体外受精）、胚胎、 、血库—hla、淋巴细胞、红细胞。4、微生物—---、---、细胞株、 原代培养（食品工业）—奶酷、啤酒、酵母。5、hla配型—移植、组织库—皮肤、骨、---瓣膜、、骨骼肌。6、遗传工程 、 医学研究。
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