步骤：(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、，逐滴加入二--- (dmso)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞，用加的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(dmsozui后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2 ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
目前市面上常用的程序降温仪工作原理是：通过微处理器控制系统和电磁阀，控制喷入腔体中的液氮量来控制降温速率。其优点是：控温，受外界环境影响小。尤其是处理大体积样本时，快速喷入的大量液氮更易带走样本中的潜热，从而快速降温，------的样本复苏活性。样品在相变过程中(液态->;固态)会释放大量潜热。当潜---出现，冻存液开始结冰时，样本开始释放热量，程序降温仪，温度可能反而会上升。此时，就需要向腔体内迅速喷入大量液氮，从而快速降温，拉大温差，带走热量，使得生物样本迅速越过相变期。
程序降温仪其主要功能是：可以根据各种被冻存样品不同的需求，选择一种适合的降温速度进行冷冻。从而使被冻样品的复苏成活率得到很大的提升。由于智能程序降温仪的使用很灵活简便，该仪器---适用于：探索和优化各种被冻样品的佳冻存方案。还能方便的测试出一种被冻细胞的相变温度。再编制出合适的降温程序后，能使被冻细胞迅速安全的渡过相变期。
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